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高效液相色譜柱的三個基本要點

更新時間:2022-05-09      點擊次數:1026
  高效液相色譜柱的三個基本要點
  1.柱的構造
  高效液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70Kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內壁多經過拋光。也有人在不銹鋼柱內壁涂敷氟塑料以提高內壁的光潔度,其效果與拋光相同還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細管柱。液相色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板,是燒結不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2-20um(5-10um),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出,柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應。
  2.柱的發展方向
  因強調分析速度而發展出短柱,柱長3~10cm,填料粒徑2~3um。為提高分析靈敏度,與質譜(MS)聯接,而發展出窄徑柱、毛細管柱和內徑小于0.2mm的微徑柱(MICROBORE)。細管徑柱的優點是:①節省流動相;②靈敏度增加;③樣品量少;④能使用長柱達到高分離度;⑤容易控制柱溫;⑥易于實現LC-MS聯用。
  但由于柱體積越來越小,柱外效應的影響就更加顯著,需要更小池體積的檢測器(甚至采用柱上檢測),更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設備應具備如下性能:輸液泵能精密輸出1~100ul/min的低流量,進樣閥能準確、重復地進樣微小體積的樣品。且因進樣量小,要求高靈敏度檢測器,電化學檢測幫質譜儀在這方面具有突出優點。
  3.柱的填充
  高效液相色譜柱的性能除了與固定相性能有關外,還與填充技術有關。在正常條件下,填料粒度>20um時,干法填充制備柱較為合適;顆粒<20um時,濕法填充較為理想。填充方法一般有四種:①高壓勻漿法,多有用于分析柱和小規模制備柱的填充;②徑向加壓法;③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;④干法,柱填充的技術性強,大多數實驗室使用己填充好的商品柱。
  必須指出,高效液相液相色譜柱的獲得,裝填技術是重要環節,但根本問題還在于填料本身性能的優劣,以及配套的色譜儀系統的結構是否合理。

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